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花板无梯度背景高 在完成所有实验步骤进行底物TMB溶液显色后，酶标板中的孔有颜色但没有梯度，背景也可能较高，. 出现该现象的可能原因： 底物溶液TMB未置于阴凉避光处保存，实验前溶液已经变蓝. 孵育温度过高或者孵育时间过长，发生了较强的非特异性吸附. 没有按说明书要求洗板，特别是洗板时洗涤液的量少加了. 加样时没有换枪头造成交叉污染. 花板现象：低浓度或者低活性的包被抗体或者检测抗体，封闭不足导致的本底不稳定，洗板不充分，包被板子的问题.人儿茶酚胺进口ELISA试剂盒报价欢迎致电北京方程生物获取相关资料。
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人儿茶酚胺进口ELISA试剂盒报价. 在ELISA实验中应注意以下问题： 1.在实验前应该按相关要求将实验试剂平衡至室温. 2.包被抗体和检测抗体应该是有高活性的且都针对同一抗原. 3.试剂保存：蛋白抗体类试剂保存于-20摄氏度，显色液洗涤液保存于2-8摄氏度. 4.各试剂在使用前应充分混匀，以保证试剂的均一性和准确性. 5.严格控制反应温度和反应试剂. 6.洗板次数，洗板液的量，洗板液浸泡时间的长短，洗板的力度都是应该注意的问题. 7.相关浓缩液应按要求稀释到相应比例方可使用，PH值要保持在7.2-7.4之间. 8.在终止反应时尽量避免微孔中存有气泡. 9.终止反应完成后应该在2min内完成酶标仪读数..
3.2.2 抗原和抗体 制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG，以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰.**用亲和层析纯的抗体，这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性，可以在高稀释度进行反应，实验结果本底浅淡.如用F(ab')2进行标记，则更可避免标本中RF的干扰.在ELISA中用酶标抗原的模式不多，总的要求是抗原必须是高纯度的..
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洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败.ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的.通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质.聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来.可以说在ELISA操作中，洗涤是**主要的关键技术，应引起操作者的高度重视，操作者应严格按要求洗涤，不得马虎
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