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人凝血因子Ⅻ进口ELISA试剂盒报价

发布时间:2017-03-14 10:23:26       返回列表

人凝血因子Ⅻ进口ELISA试剂盒报价

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人凝血因子Ⅻ进口ELISA试剂盒报价样品收集、处理及保存方法 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激.使用不含热原和内毒素的试管.收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离, 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测.1000×g离心30分钟去除颗粒, 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物, 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻,尽可能的不要使用溶血或高血脂血.如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤,不要在37℃或更高的温度加热解冻,应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻, 试剂的准备 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存,稀释前将标准品振荡混匀, 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释.

(2)过碘酸盐氧化法:本法只适用于含糖量较高的酶.辣根过氧化物酶的标记常用此法.反应时,过碘酸钠将HRP分子表面的多糖氧化为醛基很活泼,可与蛋白质上的氨基形成Schiff氏碱而结合.酶标记物按克分子比例联结,其**比例为:酶/抗体=1-2/1.此法简便有效,一般认为是HRP**可取的标记方法,但也有人认为所有试剂较为强烈,各批实验结果不易重演.. 按以上方法制备的酶结合物一般都混有未结合物的酶和抗体.理论上,结合物中混有的游离酶一般不影响ELISA中**后的酶活性测定,因经过**洗涤,游离酶可被除去,并不影响**终的显色.但游离的抗体则不同,它会与酶标抗体竞争相应的固相抗原,从而减少了结合到固相上的酶标抗体的量.因此制备的酶结合物应予纯化,去除游离的酶和抗体后用于检测,效果更好.纯化的方法很多,分离大分子化合物的方法均可应用.硫酸铵盐析法**为简便,但效果并不理想,因为此法只能去除留在上清中的游离酶,但相当数量的游离抗体仍与酶结合物一起沉淀而不能分开.用离子交换层析或分子筛分离更为可取,高效液相层析法可将制备的结合物清晰地分成三个部分:游离酶、游离抗体和纯结合物而取得**的分离效果,但费用较贵. 结合物制得后,在用作ELISA试剂前尚需确定其适当的工作浓度.使用过浓的结合物,既不经济,又可使本底增高;结合物的浓度过低,则又影响检测的敏感性.所以必须对结合物的浓度予以选择.**适的工作浓度就是指结合物稀释至这一浓度时,能维护一个低的本底,并获得测定的**灵敏度,达到**合适的测定条件和测定费用的节省.就酶标抗体本身而言,它的有效工作浓度是指与其相应抗原包被的载体作试验时,能得到阳性反应的**高稀释度.例如某一HRP:抗人IgG制剂标明的工作浓度为1:5000,表示该制剂经1:5000稀释后,在与人IgG包被的固相作ELISA试验时,将发生阳性反应.但在用于具体的ELISA检测中,酶标抗体的**适工作浓度受到固相载体的性质、包被抗原或抗体的纯度以及整个检测系统如标本、反应温度和时间等的影响,因此必须在实际测定条件下进行"滴配"选择能达到高敏感度的**稀释度作为试剂盒中的工作浓度

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标本的采取和保存 可用作ELISA测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、粪便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成份.有些标本可直接进行测定(如血清、尿液),有些则需经预处理(如粪便和某些分泌物).大部分ELISA检测均以血清为标本.血浆中除尚含有纤维蛋白原和抗凝剂外,其他成份均同等于血清.制备血浆标本需借助于抗凝剂,而血清标本只要待血清自然凝固、血 收缩后即可取得.除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本.在ELISA中血浆和血清可同等应用.血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色.

 

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